UHPLC色譜柱與傳統(tǒng)HPLC色譜柱相比，主要區(qū)別在于其能夠承受更高的壓力，并且使用了更小粒徑的固定相填料。
1.更高壓力
-UHPLC系統(tǒng)能夠在更高的壓力下驅(qū)動流動相通過色譜柱。這使得流動相在柱內(nèi)的流速可以更快，同時保持較高的分離效率。高壓力可以使流動相更有效地滲透到固定相的孔隙中，加速樣品組分的傳質(zhì)過程，從而縮短分析時間。
2.小粒徑固定相填料
-通常采用粒徑更小的固定相填料，一般為1.7-3μm左右，而傳統(tǒng)HPLC色譜柱填料粒徑通常在5μm以上。小粒徑填料具有更大的比表面積，能夠提供更多的活性位點(diǎn)，增強(qiáng)樣品組分與固定相之間的相互作用，從而提高分離效率和分辨率。同時，小粒徑填料也使得傳質(zhì)路徑更短，進(jìn)一步加快了傳質(zhì)速度，有利于快速分離。
UHPLC色譜柱的基礎(chǔ)原理：
在液相色譜中，樣品溶液通過色譜柱時，不同組分在固定相和流動相之間發(fā)生分配、吸附、離子交換或尺寸排阻等相互作用。固定相是填充在色譜柱內(nèi)的顆粒或涂層，流動相是攜帶樣品和洗脫組分的液體。
1.分配色譜
-基于樣品組分在固定相和流動相之間的分配系數(shù)差異進(jìn)行分離。當(dāng)流動相攜帶樣品通過色譜柱時，組分在兩相之間不斷分配。分配系數(shù)大的組分在固定相中保留時間較長，而分配系數(shù)小的組分則較快地隨流動相流出色譜柱。
2.吸附色譜
-依靠固定相表面的活性位點(diǎn)對樣品組分的吸附作用。不同組分與固定相表面的親和力不同，親和力強(qiáng)的組分在固定相上停留時間長，從而實(shí)現(xiàn)分離。
3.離子交換色譜
-固定相上帶有可交換的離子基團(tuán)，樣品中的離子與固定相上的離子進(jìn)行交換。不同離子與固定相離子交換能力不同，從而在色譜柱中實(shí)現(xiàn)分離。
4.尺寸排阻色譜
-根據(jù)樣品分子的尺寸大小進(jìn)行分離。色譜柱內(nèi)填充有具有特定孔徑的多孔填料，小分子可以進(jìn)入填料孔隙，而大分子被排斥在外，小分子在柱內(nèi)停留時間長，大分子先流出色譜柱。
